Это была не самая короткая лекция, но содержание её непременно следовало донести до европейского научного сообщества.
Причина, по которой я вообще всё это объясняю.
Нужно было как можно скорее донести эти сведения до Европы. Нужно было поскорее искоренить гепатит С.
Конечной целью этого исследования было превратить гепатит С в редкое инфекционное заболевание. Это достижимая цель.
Для этого участие европейского медицинского сообщества было критически важным. Кто знает, может, если весь мир объединится, лекарство появится быстрее?
То, что они, казалось, почти ничего не знали о вестях из Америки, было несколько ниже моих ожиданий.
Я обвел взглядом аудиторию.
— На этом всё. Мы подготовили примитивные методы реагирования на NANBH и подтвердили, что это реально существующая болезнь. Что нам предстоит выяснить дальше?
Казалось, никому нечего было сказать.
На доске были записаны имена врачей-предшественников, упомянутых сегодня. Вирхов, Кох.
Следующий в очереди — Беринг!
Третий гигант «Шарите».
Антитоксин против дифтерии, созданный Берингом, — это лекарство, снизившее смертность от детской дифтерии, достигавшую тогда почти 50%, до уровня 10%.
Он знаменит историей о собачьей упряжке на Аляске.
Так вот. Какое отношение сегодняшний объект обсуждения, вирус гепатита С, имеет к Берингу?
Скоро узнаете. Я указал мелом на любого студента, сидевшего в первых рядах.
— Какой метод использовал Беринг, когда создавал антитоксин против дифтерии?
Всё очень просто.
— Э-э... он ввел дифтерийный токсин животному, а затем извлек дифтерийный антитоксин из крови этого животного.
— Как?
— Ну... центрифугирование?
Я кивнул. Это был несложный вопрос, такое нужно знать.
— Верно. Здесь нужно запомнить две вещи. Первое: в крови пациента существуют антитела к болезни. Второе: если прокрутить сыворотку в центрифуге, можно выделить желаемый объект.
— Да?..
На этот раз руку поднял один из профессоров-стариков. С выражением лица, означающим, что он ничего не понимает.
— Да, профессор.
— Профессор Мюллер из отделения инфекционных заболеваний «Шарите». Нет, я впервые слышу, что вирус можно выделить с помощью центрифуги. Вы уверены, что это проверенные данные?
Я нарисовал на доске печень.
— Где находится вирус гепатита?
— Ну... в клетках печени?
— Верно. Тогда как вирус NANBH выходит из клеток печени и попадает в кровь? Вы задумывались об этом?
Профессор Мюллер нахмурился.
— Не знаю.
— У этого вируса есть только два способа покинуть клетку печени: либо клетка лопается, либо вирус секретируется. Но поскольку NANBH не разрушает клетки печени...
— Секретируется?
— Да. Тогда какие вещества клетки печени секретируют особенно активно?
— Вероятно, липопротеины.
— Верно.
Мы приближаемся к правильному ответу. Я кивнул.
— Значит, вы хотите сказать, что можно сконцентрировать вирус NANBH до такой степени, что его можно будет извлечь из крови пациента вместе с липопротеинами?
— Если говорить об объеме, то только с помощью центрифугирования можно сконцентрировать вирус гепатита в крови примерно в 1000 раз.
***
На самом деле... роль исследователей прошлых поколений на этом заканчивалась.
При технологическом уровне 1970-х годов обнаружение вируса гепатита С в ходе истории вообще не происходило.
С этого момента мне пришлось самому проектировать эксперимент. Хорошо, что в итоге всё получилось.
Снова послышался гул голосов.
В то время европейское медицинское сообщество сильно отставало по уровню технологий по сравнению с Америкой. Особенно в молекулярной биологии.
Для европейских ученых услышанное могло звучать довольно абсурдно.
— Что за...
На этот раз другой врач, посмотрев на меня, поднял руку. Похоже, молодой профессор.
— Но даже если использовать этот метод, совершенно не укладывается в голове, как американские исследователи смогли определить полную последовательность нуклеотидов этого вируса всего за несколько недель.
Почему они всё время твердят, что это невозможно?
На самом деле я знаю причину. Даже если они понимают, что это правда. Оспаривание — лучший способ проверить гипотезу.
— Почему?
Он продолжил свой вопрос.
— Разве на поиск вируса гепатита не должны уйти годы, а на прочтение тысяч нуклеотидов — еще год?
Я покачал головой.
— Нет. Во-первых, мы извлекли липопротеины с помощью центрифугирования.
— Да.
— Американские исследователи извлекли мРНК из крови пациента, ввели её в бактерии, чтобы те синтезировали белок, а затем заставили его прореагировать с антителами пациента, обработанными флуоресцентным красителем.
Доктор Мюллер посмотрел на меня так, будто я несу бред.
Там ведь проблема в цифрах.
— Что? В крови циркулируют как минимум миллионы фрагментов РНК.
Я знаю.
— Изначально план был именно таким. Кто-нибудь знает, какова средняя продолжительность жизни мРНК в крови?
— Несколько часов?
— Если подождать вот так несколько дней, человеческая мРНК в крови исчезнет, а останется только генетический материал, находящийся внутри вируса, верно?
Врачи в зале снова зашумели.
Доктор Мюллер смотрел на меня с довольно серьезным выражением лица, словно шестеренки в его голове медленно вращались.
— Это выглядит так. В крови миллионы фрагментов мРНК. Но если сконцентрировать их центрифугой, их количество сократится до тысяч.
— Допустим.
— Если подождать, пока из этих тысяч мРНК самопроизвольно деградируют, можно сократить количество целей до нескольких десятков.
— А...
Доктор Мюллер был поражен.
— Таким образом, работу, которая заняла бы 10 лет, мы превратили в ту, что можно сделать за выходные.
На самом деле, раз гипотеза сформирована таким образом, это уже не вопрос веры. Это стало областью гипотез, которые можно легко опровергнуть.
Достаточно подождать несколько дней, чтобы проверить.
— Если доктор Мюллер всё еще не верит моим словам... метод я вам сообщил, так что инвестируйте день-другой и проверьте сами.
— А. Пожалуй, так и сделаю.
Доктор Мюллер тут же собрал вещи и вышел из аудитории. Словно не мог ждать ни минуты. Прямо как в ситкоме...
Решительности этому старшему коллеге не занимать.
Ну, если он выйдет сейчас, то к завтрашнему вечеру получит результат, разве нет? Если подумать, выйти прямо сейчас — вполне разумная реакция.
Я кивнул.
— Хм, пусть кто-нибудь подытожит вторую часть лекции и передаст доктору Мюллеру.
Воцарилось молчание.
***
В аудитории стало тихо, как в могиле. Словно я раскрыл нечто шокирующее.
На самом деле, даже в 1970-х годах Европа в области молекулярной биологии сильно проигрывала Америке — новому лидеру.
Возможно, сегодняшняя лекция для европейского научного сообщества была чем-то невообразимым.
В любом случае.
Этот процесс — метод, которым мы нашли вирус NANBH. Тогда здесь должен возникнуть закономерный вопрос...
Я снова обвел взглядом аудиторию.
Как и ожидалось, один врач с суровым лицом смотрел на меня. Похоже, у него были претензии к теории, изложенной до сих пор.
Неужели нашел какую-то лазейку?
— Но... обратная транскриптаза копирует РНК. Если ждать, пока мРНК деградирует, разве мРНК вирусного белка не деградирует вместе с ней?
Я покачал головой.
Если бы мы копировали «мРНК, синтезирующую вирусный белок», то так бы и было. Но ситуация была иной.
— Хороший вопрос, но почему вы считаете, что внутри вируса нет РНК?
— Внутри вируса должна быть ДНК.
Я покачал головой. Это было ошибкой.
Ученые 1970-х годов думали, что раз гепатит B — ДНК-вирус, то и гепатит C — ДНК-вирус.
Это было ошибочное мнение.
— Хм, вирус NANBH — это РНК-вирус. Поэтому деградация со временем убирает человеческую мРНК, но вирусная информация остается нетронутой.
***
Почти закончили.
Теперь осталось только прочитать нуклеотиды.
— Тогда... теперь вам, должно быть, интересно, как мы смогли прочитать весь геном вируса за несколько дней. Это довольно просто.
Аудитория снова уставилась на меня.
— Но ведь прочитать 10 000 нуклеотидов за несколько дней просто невозможно, не так ли?
По крайней мере, это не те слова, которые стоит произносить в этой аудитории. Что это за место?
Здесь мы создали науку патологию, открыли возбудителя туберкулеза, создали антитоксин против дифтерии.
Перечислять всё — смешно.
Ответ можно найти.
— Нет. Допустим, мы извлекли вирусную РНК описанным ранее методом, превратили её в кДНК, вставили в плазмиду и прочитали. Длиной примерно в 100 нуклеотидов.
— Да...
— Если следовать этому процессу, высока вероятность, что в результате мы получим случайные фрагменты, верно?
— Но если это случайные фрагменты, то нет способа прочитать генетическую информацию целиком.
Указание на то, что порядок неизвестен. Конечно, это замечание наполовину верно, а наполовину нет.
— Мы используем случайность как оружие.
— Что?
— Допустим, геном вируса имеет длину 10 000 нуклеотидов. Если 40 исследовательских институтов, использующих описанный мной метод, прочитают фрагменты размером в 100 нуклеотидов каждый... даже если каждый прочитает всего по 10 штук, статистически можно покрыть всю последовательность нуклеотидов 4 раза.
— Почему это так?
— Потому что это случайность!
Остается только собрать пазл. Это метод, с помощью которого я нашел вирус гепатита С и прочитал последовательность нуклеотидов всего за несколько недель.
Я же говорил, что согласно моей идее CDC привлекли десятки аспирантов-математиков и заставили их собирать пазл по кусочкам.
Это было поразительно быстро.
— Статистически вирусный геном обязан находиться внутри собранных нами фрагментов. Вот так... от обнаружения до анализа всей последовательности прошло всего несколько дней.
Вот почему Германия проиграла войну.
Гибкость мышления, промышленный масштаб, технологический предел — они проигрывают по всем трем пунктам.
— ...Хотя, наверное, не стоит так говорить?

Комментарии

Загрузка...